實驗室中常用的是以硅膠和氧化鋁做固定相的吸附柱。硅膠層析法的分離原理是根據物質在硅膠上的吸附力不同而得到分離，一般情況下極性較大的物質易被硅膠吸附，極性較弱的物質不易被硅膠吸附，整個層析過程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸過程。
 

　　雖然很多化學實驗書中都敘述了層析柱的實驗方法，但大多數都是比較雷同地泛泛地描述，而且有些描述在實驗室中并不適用。
 

　　例如，很多書中都提到裝柱時先在底層鋪一層石英砂，倒入固定相后再在頂部鋪一層石英砂。比較繁瑣，而且效果也不是很好，在實驗室中不適用。
 

　　根據多年來使用層析柱的操作經驗，接下來為大家分享一下層析柱的硅膠及洗脫劑的使用吧。
 

　　1、硅膠的使用
 

　　初做層析柱很容易把柱子裝得長了或短了，有時還會有大量的硅膠剩余，浪費硅膠，這主要是對硅膠等固定相的使用的量沒有掌握。層析柱用的硅膠一般是100-200目，100毫升硅膠的質量在47克左右，如果裝一個直徑是2.8厘米的柱子，可以裝18厘高。
 

　　為了避免浪費硅膠和溶劑，最初學習裝柱時最好對實驗室中各種不同規格的柱子摸摸底。方法很簡單：用量筒量出100毫升干硅膠，直接倒入各種規格的柱子中，敲實，用刻度尺量出硅膠在柱子中的高度，這樣就可以做到心中有數了。
 

　　一般在裝柱的時候可以根據實驗所需柱子的高度來調整硅膠的使用量，這樣就可以大大地節省硅膠的使用，避免造成沒有必要的浪費。稱量硅膠時一般稱30~70倍于上樣量，如果極難分，也可以用100倍量以上的硅膠。
 

　　2、洗脫劑的使用
 

　　洗脫劑的極性可用薄層層析來確定，一般以待分離樣品Rf值為0.2-0.3為宜。選擇的洗脫劑應該使兩相鄰物質Rf值之差大化。不要認為在板上爬得高分離的效果就比較好，如果Rf在0.6，即使相差0.2也不容易在柱子上分開，因為柱子是一個多次爬板的過程，可以通過公式的比較：0.6/0.8一次的分離度，肯定不如(0.2/0.3)的三次方或四次方大。
 

　　有時雖然在薄層板上看到分離的效果很好，但過層析柱時還是很難分開。這主要的原因就是薄層層析用硅膠比層析柱用硅膠要細得多，所以分離效果好。
 

　　解決的辦法就是降低洗脫劑的極性，一般層析柱用洗脫劑比薄層層析用的展開劑極性要再降低一倍可以達到比較好的分離效果。當所分離物質極性跨度較大時，可用采梯度洗脫的方法，即逐漸增加溶劑的極性，使吸附在硅膠上的不同化合物逐個洗脫下來。
 

　　常用的展開劑極性小的用乙酸乙酯：石油醚系統;極性較大的用甲醇：氯仿系統;極性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系統;拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸。對于很難分離的化合物，一是增加柱子的長度和直徑，二是減小洗脫劑的極性，這樣可以很好地將混合物分開。
 

　　在同樣能洗脫的情況下，盡量使用毒性小的洗脫劑。例如，乙酸乙酯：石油醚系統和二氯甲烷：石油醚系統，在同樣都能洗脫的情況下，應該用毒性小的乙酸乙酯：石油醚系統。
 

　　另外洗脫劑在過柱子后最好也回收使用，一方面環保，另一方面也能節省部分經費，缺點是要消耗一定的人工。
 

　　這里要注意的是，一般在過柱同時進行的是減壓旋蒸，混合溶劑的比例由于揮發度的不同會導致變化，一般會使得極性變大，在梯度淋洗時比較合適。還有一般回收的溶劑中會有少量水分，使用前先要用干燥劑干燥好才能使用。